冬蟲(chóng)夏草是一種真菌,它主要寄生于活動(dòng)的昆蟲(chóng)體內(nèi)進(jìn)行有機(jī)質(zhì)的分解碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽內(nèi)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。人工栽培時(shí)必須合理地配制這類營(yíng)養(yǎng)成份,才能滿足它的生長(zhǎng)要求。現(xiàn)篩選了以下幾種最適宜冬蟲(chóng)夏草菌絲生長(zhǎng)的原料及配方如下:
一、母種制作 培養(yǎng)基配方
1、馬玲薯200克(煮汁)、葡萄糖20克、瓊脂20克、磷酸二氫鉀1克、硫酸鎂1克、蛋白胨1克、牛肉膏0.5克、水1000ml。
2、蛋白胨1克、葡萄糖20克、酵母膏1克、磷酸二氫鉀1克、硫酸鎂1克、VB11克、VB121克、瓊脂20克、 水1000ml。
3、豆芽500克(煮汁)、白糖20克、瓊脂20克、磷酸二氫鉀1克、硫酸鎂1克、蛋白胨0.5克、水1000ml。將上述配方任選一組,按其它母種制作常規(guī)方法操作,分裝于180×18試管的1/5,高壓滅菌1.5磅維持30分鐘,制成斜面培養(yǎng)基備用。
接種:待斜面培養(yǎng)基表面余水干后,放入無(wú)菌接種箱內(nèi)接種,將分離的純冬蟲(chóng)夏草母種挑取黃豆大一塊放入斜面培養(yǎng)基上,每支母種可接10~15支,但母種的傳代不超過(guò)二次,否則失去感染力。
培養(yǎng):接種后,放置15~18℃條件下恒溫培養(yǎng)。三天后菌絲開(kāi)始萌發(fā),淡黃色而旺盛的絨毛團(tuán)菌絲向四周蔓廷,七天左右菌絲表面可產(chǎn)生子座(即草),這種草雖然沒(méi)有蟲(chóng)的寄主,它的營(yíng)養(yǎng)成份與冬蟲(chóng)夏草完全一致,正常情況下10天左右菌絲可長(zhǎng)滿斜面培養(yǎng)基。
二、液體種制作 培養(yǎng)基配方
1、米湯(大米煮至半熟過(guò)濾)500ml、葡萄糖5克、磷酸二氫鉀1克、硫酸鎂1克、蛋白胨1克、牛肉膏1克、 VB11克、VB121克 。
2、面湯(煮面條后的湯)500ml、白糖5克、蛋白胨1克、牛肉膏1克、硫酸鎂1克、酵母膏1克、 磷酸二氫鉀1克 。
3、清泉水500ml、葡萄糖10克、蛋白胨2克、牛肉膏2克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂2克、 VB12克、VB122克 。 將配好的營(yíng)養(yǎng)液裝入500ml的三角瓶?jī)?nèi),每瓶裝150ml,瓶口塞上棉塞,高壓滅菌1.5磅30分鐘。 接種培養(yǎng):冷卻后,放入接種箱內(nèi)無(wú)菌操作,將母種培養(yǎng)基取手指頭大一塊放入液體瓶中,每支母種可接5-10瓶,置20~25℃條件下先靜置培養(yǎng)三天,然后再同樣溫度下放入搖床振動(dòng)培養(yǎng),若沒(méi)有搖床,每天把液體瓶用手搖3-5次,每次3-5分鐘,經(jīng)過(guò)10-15天的培養(yǎng)即成為液體種。 如果栽培量大,液體種不夠的情況下,應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)量還可將液體種擴(kuò)制液體種2-3次(級(jí)),無(wú)論哪級(jí)液體種都可用于直接栽培冬蟲(chóng)夏草,但母種或液體種傳代過(guò)多會(huì)影響效果。液體種不宜存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng),一般在低溫或避光條件下不超過(guò)一個(gè)月使用效果較好,最好是在栽培季節(jié)前制作液體種。
檢驗(yàn)液體種是否培養(yǎng)成功:
方法是經(jīng)過(guò)10-15天恒溫和振動(dòng)培養(yǎng),從色澤上看沒(méi)有明顯變化,只有在停止振動(dòng)三天后,液體表面逐漸出現(xiàn)黃白色菌絲,無(wú)任何異色現(xiàn)象,可證明液體種已培養(yǎng)成功,隨著時(shí)間長(zhǎng)久液體表面形成一層很厚的菌皮,在栽培使用時(shí)必須去掉表面這層過(guò)厚的菌皮利用清液。
三、固體菌種制作
冬蟲(chóng)夏草的栽培一般是使用液體菌種,固體菌種還可以試測(cè)蟲(chóng)草子座能否生長(zhǎng),也可以用固體培養(yǎng)基或PDA培養(yǎng)基直接栽出蟲(chóng)草,它在大米等固體培養(yǎng)基上或桑蠶上都能長(zhǎng)出子座,在適宜的昆蟲(chóng)體上噴入液體種就能長(zhǎng)出冬蟲(chóng)夏草。
培養(yǎng)基配方
1、將大米用水煮至半生過(guò)濾,裝入罐頭瓶?jī)?nèi),用牛皮紙或塑料薄膜封口滅菌。
2、活玉米或活小麥直接裝入罐頭瓶?jī)?nèi)(若干品必須浸泡12小時(shí)以上)封口滅菌。
3、棉殼95%、米粉3%、黃豆粉2%、含水量60%,裝瓶滅菌。在1.5磅壓力下60分鐘,或常壓滅菌100℃保持5-6小時(shí),冷卻接種。
接種:在接種箱內(nèi)無(wú)菌操作,無(wú)論固體母種或液體種都可接入固體培養(yǎng)基。母種可挑取培養(yǎng)基手指頭大一塊放在固體培養(yǎng)基表面,也可以用接種針沾取菌絲在固體培養(yǎng)基中攪拌均勻。液體種接種是將種液滲入固體培養(yǎng)基中搖勻,每瓶用種量不超過(guò)5ml。
培養(yǎng):固體種需在15~18℃的暗光條件下培養(yǎng),用液體種接的只需15-20天菌絲可長(zhǎng)滿瓶,用固體母種接的需要一個(gè)月時(shí)間菌絲才能長(zhǎng)滿瓶。